PCR檢測常見問題之假陽性分析

 　　PCR檢測常見問題之假陽性分析
　　利用PCR方法檢測轉基因成分時，經常出現假陽性、假陰性、非特異性擴增和塗抹帶。尤其是假陽性和假陰性可使檢測結果得出錯誤結論，有時可造成嚴重後果。為了提高轉基因檢測的準確性和可靠性，PCR檢測應盡量減少假陽性、假陰性、非特異性擴增和塗抹帶現象的發生。一個好的PCR方法不但要求特異性好、靈敏度高、還要求具有高的可重複性、重現性、魯棒性，盡量減少假陽性、假陰性和非特異性擴增。
　　本文對PCR檢測中出現的假陽性原因進行分析
　　（一）假陽性現象
　　假陽性是指檢測陰性材料得到陽性結果。如果一次實驗中的幾個陰性對照中出現一個或幾個陽性結果，提示本次實驗中其它標本的檢測結果可能有假陽性。實驗中設立的陰性對照可提示有無假陽性結果出現。
　　（二）造成假陽性的原因
　　1. 樣品間交叉汙染：樣本汙染主要有收集樣本的容器被汙染，或樣本放置時，由於密封不嚴溢於容器外，或容器外粘有樣本而造成相互間交叉汙染；樣本核酸模板在提取過程中，由於吸樣槍汙染導致標本間汙染；
　　2. PCR試劑的汙染：主要是由於在PCR試劑配製過程中，由於加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板汙染。
　　3. PCR擴增產物汙染：這是PCR反應中zui主要zui常見的汙染問題。因為PCR產物拷貝量大(一般為1013拷貝/ml)，遠遠高於PCR檢測數個拷貝的極限，所以極微量的PCR產物汙染，就可形成假陽性。
　　4. 氣溶膠汙染：在空氣與液體麵摩 擦時就可形成氣溶膠，在操作時比較劇烈地搖動反應管，開蓋時、吸樣時及汙染進樣槍的反複吸樣都可形成氣溶膠而汙染。據計算一個氣溶膠顆粒可含48000拷貝，因而由其造成的汙染是一個值得特別重視的問題。
　　5. 實驗室中克隆質粒的汙染：由於克隆質粒在單位容積內含量相當高，另外在純化過程中需用較多的用具及試劑，而且在活細胞內的質粒，由於活細胞的生長繁殖的簡便性及具有很強的生命力，其汙染可能性也很大。在分子生物學實驗室及某些用克隆質粒做陽性對照的檢驗室，這個問題比較常見。