伟德bevictor中文网页核心要點概要

 　　伟德bevictor中文网页是一個十分重要的環節。不管是設備還是環境都是要的合格，在進行幹擾檢測之前應該考慮靶基因產物的半衰期及其在細胞中的豐度和表達調控機製。由於伟德bevictor中文网页是通過降解靶基因RNA而達到一直基因表達的目的，因此它不使用於研究那些具有長半衰期的蛋白質在細胞中的功能，伟德bevictor中文网页不能像基因敲除（gene knockout）一樣在特定的細胞中確實靶基因，它隻能較大限度的抑製靶基因的表達，其抑製效率zui高可達95％以上，因此這種方法又被稱為基因敲減（gene knockdown）。據此，伟德bevictor中文网页不適用於有些酶基因功能的研究，因為有時候微量的酶分子就可以在細胞中行使功能，酶基因表達的抑製並不能從表型上檢測到明顯的變化。
 
　　為了使伟德bevictor中文网页達到理想效果，我們必須注意以下事項：
 
　　不同細胞的轉染效率不同，一次對於不同的轉染試劑和培養細胞需要通過預試驗來確定轉染的條件，對一種細胞行之有效的方法並不一定適用於另一種細胞。正常情況下生長狀況良好的細胞轉染效率比生長狀況較差的細胞要高。伟德bevictor中文网页盡量采用傳代次數較少的細胞，因為轉染效率隨著傳代次數的增加而逐漸下降，一般采用傳代次數在50代以內的細胞進行轉染。對細胞的轉染效率影響比較大的另一種因素是細胞的生長密度，伟德bevictor中文网页對貼壁的細胞來說，*轉染密度為30％～70％，太低或太高都會導致轉染效率的下降。
 
　　如果一個siRNA分子在細胞中不能抑製靶基因的表達，首先應該查明伟德bevictor中文网页所采用的基因序列和試驗用的細胞係是否來源於同一物種，然後檢查所采用的基因序列是否是可靠的，因為它可能存在序列錯誤、突變（在腫瘤細胞中）或核苷酸多態性。
 
　　伟德bevictor中文网页抑製靶基因的表達以後，先觀察細胞表型的變化，如細胞生長狀況與形狀的變化。然後通過免疫印記與免疫熒光檢測細胞內蛋白質水平的變化。如果沒有特異性的靶蛋白抗體，伟德bevictor中文网页可以通過Northern印記確定其mRNA變化。
 
　　必須采取措施防止並消除可能的Rnase汙染。因為極少量的Rnase就可以破壞整個伟德bevictor中文网页試驗，而RNAase遍布整個實驗室，用適當的陽性siRNA對照優化轉染和檢測條件。對於大多數細胞來說看家基因是zui合適的陽性對照，用不同濃度的看家基因siRNA轉染細胞，伟德bevictor中文网页48小時後檢測看家基因蛋白質或mRNA水平，以確定靶siRNA轉染的*條件，試驗中應包含1～2個陰性對照以確定siRNA分子對靶基因的抑製作用的特異性。
 
　　伟德bevictor中文网页用於轉染的siRNA分子的濃度同靶基因的特性和細胞類型相關。濃度太高會導致細胞毒性，濃度太低則不易檢測到靶基因表達水平的變化一次用於轉染細胞的siRNA分子濃度一般在30～100nmol/L之間，體外合成的siRNA分子對靶基因的抑製作用是瞬時的，伟德bevictor中文网页細胞中受到抑製的靶蛋白一般在轉染5～7天之後，即經過7～10個細胞增殖周期之後就可以逐漸恢複至正常水平。
 
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