*章 Western Blot 簡介

                    *章 Western Blot 簡介

1.1  Western Blot 原理

    與(yu)  Southern 或 Northern 雜交方法類似，但 Western Blot 采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針"是抗體(ti) ，“顯色"用標記的二抗。經過 PAGE 分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體(ti) （例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體(ti) 以非共價(jia) 鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體(ti) 上的蛋白質或多肽作為(wei) 抗原，與(yu) 對應的抗體(ti) 起免疫反應，再與(yu) 酶或同位素標記的第二抗體(ti) 起反應，經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術也廣泛應用於(yu) 檢測蛋白水平的表達。

                                                     

1.2  Western Blot 優(you) 點

高分辨率的電泳技術

特異敏感的抗原-抗體(ti) 反應

1-5 ng 中等大小的靶蛋白

Western Blot 結合了凝膠電泳的高分辨率和固相免疫測定的特異敏感等多種優(you) 點，可檢測到低至 1～

5 ng（zui低可到 10～100 pg）中等大小的靶蛋白。

1.3  Western Blot 應用

目的蛋白的表達特性分析

目的蛋白與(yu) 其它蛋白的互作

目的蛋白的組織定位

目的蛋白的表達量分析

1.4  Western Blot 成功要素