DNA甲基化檢測服務

DNA甲基化修飾檢測服務

甲基化特異性的PCR（Methylation-specific PCR，MSP）

用亞(ya) 硫酸氫鹽處理基因組DNA，所有未發生甲基化的胞嘧啶被轉化為(wei) 尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變；隨後設計針對甲基化和非甲基化序列的引物進行PCR。通過電泳檢測MSP擴增產(chan) 物，如果用針對處理後甲基化DNA鏈的引物能得到擴增片段，則說明該位點存在甲基化；反之，說明被檢測的位點不存在甲基化。

亞(ya) 硫酸氫鹽測序法（Bisulfite sequencing PCR，BSP）

用亞(ya) 硫酸氫鹽處理基因組DNA，則未發生甲基化的胞嘧啶被轉化為(wei) 尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變。隨後設計BSP引物進行PCR，在擴增過程中尿嘧啶全部轉化為(wei) 胸腺嘧啶，zui後對PCR產(chan) 物進行測序就可以判斷CpG位點是否發生甲基化稱為(wei) BSP-直接測序方法。將PCR產(chan) 物克隆至載體(ti) 後進行測序，可以提高測序成功率，這種方法稱為(wei) BSP-克隆測序法。

高分辨率熔解曲線法（High Resolution Melting，HRM）

在非CpG島位置設計一對針對亞(ya) 硫酸氫鹽修飾後的DNA雙鏈的引物，這對引物中間的片段包含感興(xing) 趣的CpG島。若這些CpG島發生了甲基化，用亞(ya) 硫酸氫鹽處理後，未甲基化的胞嘧啶經PCR擴增後轉變成胸腺嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變，樣品中的GC含量發生改變，從(cong) 而導致熔解溫度的變化。

DNA甲基化送樣要求：

細胞（≥106 個(ge) ）、組織（≥300mg）、血液（≥1ml）、血清（≥1.5ml）等樣品材料，基因組DNA（體(ti) 積≥20μl，濃度≥50 ng/μl）。

DNA甲基化提供結果：

引物序列、實驗報告、包括MSP產(chan) 物的電泳圖片；引物序列、測序峰圖、陽性克隆質粒和實驗報告；擴增曲線、熔解曲線及實驗報告。