伟德bevictor中文网页廠家

 伟德bevictor中文网页廠家是指在進化過程中高度保守的、由雙鏈RNA（double-stranded RNA，dsRNA）誘發的、同源mRNA高效特異性降解的現象。基因沉默，主要有轉錄前水平的基因沉默(TGS)和轉錄後水平的基因沉默(PTGS)兩(liang) 類:TGS是指由於(yu) DNA修飾或染色體(ti) 異染色質化等原因使基因不能正常轉錄;PTGS是啟動了細胞質內(nei) 靶mRNA序列特異性的降解機製。有時轉基因會(hui) 同時導致TGS和PTGS。

伟德bevictor中文网页廠家 主體(ti) 實驗：

　　一、成功將siRNA表達載體(ti) 導入目的細胞

　　如果目的細胞的質粒轉染效率較低（低於(yu) 70%），則應采用腺病毒或慢病毒載體(ti) ，利用病毒載體(ti) 的高感染率、高表達特性，更好地開展RNA幹擾主體(ti) 實驗。

二、設置好分組和對照

　　按照nature的標準，一個(ge) 嚴(yan) 格的RNAi介導knockdown實驗要有6個(ge) 對照：

　　⒈轉染試劑對照（監控轉染及培養(yang) 條件對結果的影響）；

　　⒉nonsense siRNA對照（監控外源核酸本身對結果的影響）；

　　⒊positive siRNA對照（監控假陰性）；

　　⒋技術重複對照（也叫off-target 對照，也就是利用至少2個(ge) 靶點的siRNA同時實驗，2個(ge) siRNA互為(wei) off-target control，當兩(liang) 者的表型相同時，才有可能是特異性的knockdown效應）；

　　⒌rescue 對照（knockdown之後做超表達，看是否有性狀的逆轉，這也是為(wei) 了說明knockdown的特異性）；6.全表達組掃描對照（就是轉錄/表達芯片掃描，以zui終確定表型不是由於(yu) off-target造成）。

　　實際實驗中，全表達組掃描對照很少有文獻涉及。其它幾個(ge) 對照中，1,2兩(liang) 種對照即所謂的空白細胞對照、NC對照，基本是所有雜誌都要求具備的。4,5兩(liang) 種對照，主要是為(wei) 了解決(jue) off-target效應，選做一種即可，一般建議選5，涉及的實驗即所謂的“RNA幹擾回複實驗”，

　　三、（體(ti) 外）

　　一般應該從(cong) mRNA水平、蛋白質水平、細胞表型水平三個(ge) 層次來檢測幹擾效率。

　　mRNA水平：RT-PCR、Real-time PCR；蛋白質水平：Western-blot、ELISA、免疫組化；細胞表型水平：MTT、克隆形成實驗、流式細胞檢測、細胞小室實驗等。RNA幹擾效率在動物模型上的進一步驗證（體(ti) 內(nei) ）　動物模型實驗可以采取“體(ti) 內(nei) 法”和“體(ti) 外法”。

　　體(ti) 內(nei) 法，即先做裸鼠成瘤模型，再將質粒或病毒導入裸鼠，檢測RNA幹擾效果。此法操作複雜，對質粒和病毒產(chan) 品的質和量要求都較高，但是比較貼近實際，說服力較顯著。體(ti) 外法，即先將質粒或病毒導入腫瘤細胞，再將腫瘤細胞導入動物體(ti) 內(nei) ，然後檢測RNA幹擾效果。此法操作較簡單，對質粒和病毒產(chan) 品的質量要求較低，所以為(wei) 大多數文獻所采用。建議采用此方法來進行動物模型水平的實驗。