熒光定量PCR技術服務SYBR Green特性:
(1)隻有和雙鏈DNA結合後才發熒光。
(2)變性時,DNA雙鏈分開,無熒光。
(3)在延伸結束階段采集熒光信號。
(4)SYBR Green也能和非特異性的雙鏈DNA結合發光,所以必須在反應結束時做熔解曲線分析。
熒光定量PCR技術服務PCR技術於(yu) 1996年由美國Applied Biosesystems公司推出,由於(yu) 該技術不僅(jin) 實現了PCR從(cong) 定性到定量的飛躍,而且與(yu) 常規PCR相比,它具有特異性更強、有效解決(jue) PCR汙染問題、自動化程度高等特點,目前已得到廣泛應用。
TaqMan探針的特性:
(1)5′端標記有報告基團(Reporter, R),如FAM、VIC等
(2)3′端標記有熒光淬滅基團 (Quencher, Q)
(3)探針完整,R所發射的熒光能量被Q基團吸收 ,無熒光, R與(yu) Q分開,發熒光(4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針。
定量的標準樣品:
(1)含有和待測樣品相同擴增片段的克隆質粒
(2)含有和待測樣品相同擴增片段的cDNA
(3)PCR的產(chan) 物,可分別做係列稀釋。