簡述腺病毒包裝

    腺病毒（Adenovirus，AdV）是一種無包膜的線性雙鏈DNA病毒，基因組長約35000 bp，理論上可編碼22~40個(ge) 基因，兩(liang) 端各有長約100~150bp的末端反向重複序列（ITR），在其左端ITR3，端為(wei) 長約300bp的包裝信號（Ψ）。病毒顆粒直徑約80~110 nm，病毒衣殼有252個(ge) 殼粒，呈規則的正二十麵體(ti) 麵體(ti) 結構，其中包括240個(ge) 六聯體(ti) 和12個(ge) 位於(yu) 正二十麵體(ti) 頂部的五聯體(ti) 構成。

    腺病毒是一種非整合型雙鏈DNA病毒，在自然界中廣泛分布。盡管一些類型的腺病毒會(hui) 引起人胃腸道、呼吸係統或眼部的急性感染，但是應用於(yu) 基因治療研究的腺病毒是安全的，對人無致病、致畸、致癌的潛在危害。

    利用基因工程手段將腺病毒基因組DNA改造成多種基因操作表達載體(ti) ，目前常用的腺病毒包裝係統有：AdMax係統和AdEasyTM係統。

 

    AdEasyTM 包裝係統主要的特點是利用Cre/loxP係統在大腸杆菌（BJ5183）中完成外源基因插入腺病毒基因組的過程，獲得環狀的重組腺病毒基因組，並且具有在細菌中複製的必需元件。將重組腺病毒基因組酶切線性化後轉染HEK293細胞，避免了雙質粒共轉染得到重組腺病毒。

使用這個(ge) 係統需要注意以下問題： 

（1） 要用能表達Cre重組酶的特定的大腸杆菌，建議建立菌種庫以免細菌發生變化；

（2） 由於(yu) 重組是在細菌中發生的，微小的基因組變化不易發現； 

（3） 要獲得高品質的重組腺病毒毒種（高病毒產(chan) 量、高目的基因表達）應挑選多個(ge) 重組腺病毒質粒，分別轉染HEK293細胞，獲得多個(ge) 重組病毒來篩選。

 

    AdMax包裝係統是通過Cre/loxP 獲得重組病毒，這個(ge) 過程發生在HEK293細胞中，從(cong) 而避免在細菌中重組。將克隆了外源基因的腺病毒穿梭質粒與(yu) 攜帶了腺病毒大部分基因組的包裝質粒共轉染HEK293細胞，利用Cre/loxP係統的作用實現重組，產(chan) 生重組腺病毒。這個(ge) 係統有多種優(you) 勢，包括操作簡便、重組效率高、獲得的病毒產(chan) 率高、目的基因的表達水平高（因為(wei) mCMV啟動子比hCMV啟動子強若幹倍）等。 

    與(yu) AdEasy係統相比，AdMax係統有一定的優(you) 勢：隻需要3~4周就能完成從(cong) 質粒構建到重組出毒，成功率大於(yu) 98%（其中95%的克隆含有目的基因），因在真核細胞內(nei) 重組出毒，保持了對腺病毒的生存壓力，有助於(yu) 重組腺病毒的基因組的完整性；而AdEasy係統的出毒成功率隻有18~34%（Stratagene公司新版的AdEasy XL係統成功率在94%左右），且在細菌（BJ5183）中完成病毒基因組重組，理論上，失去了生存壓力的腺病毒基因組更容易發生突變，病毒遺傳(chuan) 背景及活性可能會(hui) 受到影響。

 

1、腺病毒的基因結構與(yu) 功能研究的比較清楚；

2、可裝入基因的容量較大（8K）；

3、轉染範圍廣，轉染率較高，所有腺病毒載體(ti) 均有轉染分裂期和非分裂期細胞的能力；

4、不整合到靶細胞基因組，無插入突變，無致癌性，對人無致病、致畸、致癌的潛在危害；

5、可以複製出滴度高（可以達到1011 pfu/mL）、穩定性好、基因轉移效率高的病毒；

6、適用於(yu) 在難以轉染的細胞中進行的RNA幹擾、過表達特定基因或過表達特定microRNA研究和In Vivo實驗。 

 

    重組腺病毒包裝是以Ad5血清型E1／E3缺陷型腺病毒DNA為(wei) 架，在克隆，包裝，擴增等各部條件做了改進和優(you) 化，達到了克隆陽性率更高，質量更可靠，包裝穩定，出毒迅速，滴度高等效果。在此基礎上，還拓展了更廣泛的應用，可以提供各種帶報告基因的，帶不同標簽的腺病毒構建和包裝服務。 

    所包裝的腺病毒已成功應用於(yu) 信號轉導，基因轉位，Co-IP，幹細胞研究等科研實驗。並且可以完成較高難度的克隆構建，包括具有細胞毒性作用基因的腺病毒構建，在短時間內(nei) 完成從(cong) 原始質粒到病毒DNA的構建工作。

服務簡介：

提供各種RNA幹擾和基因過表達的腺病毒包裝服務。

服務內(nei) 容：

    是以帶熒光或不帶熒光的pEC3.1（+）為(wei) 穿梭載體(ti) ，pAd/BL-Dest為(wei) 骨架載體(ti) 進行的過表達病毒包裝；以pGensil為(wei) 穿梭載體(ti) ，pAd/BL-Dest為(wei) 骨架載體(ti) 進行幹擾病毒的包裝。